CHO细胞‌全称为‌中国仓鼠卵巢细胞‌（Chinese Hamster Ovary Cells），是生物医学研究中广泛使用的‌哺乳动物细胞系‌，尤其在‌重组蛋白药物生产‌、‌疫苗开发‌和‌基因工程研究‌中具有重要地位。

一、常用配置：

• 温度：37℃（生长期）；33℃（生产期）
• 瓶容量：100~250ml小摇瓶
• 转速：120~140rpm
• CO2：5%浓度
• 湿度：70~85%RH

​​二、方案原理：

• 典型场景：CHO细胞‌（‌中国仓鼠卵巢细胞‌）的培养研究

配置参数与原理：

• 温度：37℃（生长期）；33℃（生产期）

生长期：在37°C下，细胞的代谢活动、营养摄取、能量生成（ATP合成）和生物合成（如DNA、RNA、蛋白质合成）都处于最高效率。较高的温度促进了与细胞周期相关的关键酶的活性，缩短了G1、S、G2、M每个阶段的时间，使细胞分裂更快。

生产期：当细胞达到高密度后，我们将温度从37°C降低到30-34°C（这一操作称为 “温度转移”或“Temp Shift”），可以降低代谢速率，延长培养周期。在低温下，细胞分裂（增殖）几乎完全停止或极其缓慢。细胞原本用于合成DNA和进行分裂的巨大能量和资源，被重新导向用于重组蛋白的合成、折叠和分泌。细胞从一个“繁殖机器”变成了一个“蛋白质生产工厂”。

• 瓶容量：100~250ml小摇瓶

小瓶相比大瓶，更大的比表面积，更短的氧气扩散距离，最大化氧气传递效率，防止细胞缺氧，从而支持细胞达到高密度、高活力，并最终实现高产率。

并且此处需提到一个经验法则是：摇瓶的工作体积不应超过摇瓶标称容量的20-25%。例如一个250mL的摇瓶，最大工作体积通常为50-60mL。对于对氧气需求极高的细胞（如高密度CHO细胞），有时甚至会使用10%的比率（例如：125mL摇瓶装12-15mL培养基）。

• 转速：120~140rpm

在提供足够氧气和混合的同时，最大限度地减少对细胞的剪切力损伤。

转速过低（如<80 rpm）：营养物质沉淀在底部；且溶氧不足。

转速过高（如>150 rpm）：直接撕裂细胞膜，导致细胞死亡。即使剪切力没有立即杀死细胞，也会对细胞造成应激，改变其代谢途径，影响生长和蛋白表达质量。

• CO2：5%浓度

为了维持培养环境的酸碱度（pH值）稳定在最适合细胞生长的生理范围内（通常是pH 7.2 - 7.4）

• 湿度：70~85%RH

这主要是为了在防止培养基蒸发和避免污染风险之间取得最佳平衡。

为什么不能太低？——湿度太低（例如 <60%），会造成培养皿或培养瓶内的培养基大量蒸发，渗透压升高，细胞应激与死亡。

为什么不能太高？——将湿度控制在90%以上，尤其是达到饱和湿度（100% RH）时，培养箱内壁、搁板、门缝等处极易形成冷凝水珠，有极高的污染风险。如果培养容器盖子上凝结大量水珠，可能会部分堵塞盖子上的气体交换膜（对于透气盖的培养瓶/皿），阻碍CO₂和O₂的正常交换，导致容器内部pH和溶氧失衡。长期的高湿度环境会腐蚀培养箱的金属内部结构、电路和传感器，缩短设备寿命，增加维护成本和故障风险。

我们的CO2摇床内都带有水盘（湿度盘），在37°C下，其产生的自然蒸发就能使箱内湿度维持在大约90%。因此，通常不需要额外加湿。标准的操作反而是通过向水盘加入无菌水来维持这个自然湿度，并防止细菌在水盘中滋生。如果湿度仍然过高，有些实验方案甚至会建议排空水盘来主动降低湿度。